T淋巴細胞亞群的檢測是細胞免疫檢測的最新指標之一。隨著(zhù)抗T細胞單克隆抗體的問(wèn)世及各種檢測方法的建立。 T淋巴細胞亞群檢測已經(jīng)在基礎醫學(xué)和臨床醫學(xué)研究中得到廣泛應用。
一、T淋巴細胞亞群及其功能：
T淋巴細胞及其分類(lèi)主要應用抗T細胞表面抗原McAb.根據T淋巴細胞表面分化抗原將成熟T細胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群，T淋巴細胞的功能與表現型之間的對應關(guān)系是相對的，其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響，并受MHC抗原的制約，許多研究證明，CD4+T細胞具有殺傷活性，介導Ι類(lèi)抗原不相容時(shí)的靶細胞溶解。TU等研究表明，CD4+的細胞毒活性存在兩種完全不同的機理，并證明TH1和TH2的細胞毒活性不同。前者強，后者弱或無(wú)活性。Dennert等發(fā)現，克隆化的T淋巴細胞具有輔助，細胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應作用，這種功能的多樣性有賴(lài)于所采用的分析方法。CD4+細胞識別Ⅱ類(lèi)MHC抗原，其效應的發(fā)揮也受Ⅱ類(lèi)抗原的制約；CD8+細胞識別Ι類(lèi)MHC抗原，發(fā)揮免疫效應也受其控制。
二、T細胞亞群的檢測方法：
人類(lèi)T細胞亞群的檢測方法種類(lèi)繁多，但大多都是根據T細胞表面抗原與其McAb的特異性反應設計的。根據檢查標本的取材及所采用的方法主要分為兩大類(lèi)：1.體液中的T細胞亞群的分析；2、組織中T細胞亞群的檢測。前者包括血液、胸腹腔積液，腦脊液等；后者包括腫瘤浸潤細胞，移植物侵潤細胞以及炎癥浸潤細胞等。
(一)、體液中T細胞亞群的檢測方法
一般情況下，體液需要Ficoll-Hypaqu分離富含淋巴細胞的單個(gè)核細胞（MNC），然后根據條件選擇適宜的免疫學(xué)方法檢測。
1、酶免疫染色技術(shù)：常規分離MNC，調整細胞濃度為1×105~106個(gè)/ml，取細胞用不同亞群的McAb(一抗)和酶標抗體（二抗）或與酶抗體復合鏈接物，在相應底物作用下顯色，普通光鏡計數陽(yáng)性細胞，計算出各亞群的百分比。
2、流式細胞儀：機體免疫狀態(tài)是衡量機體是否患病的重要指標，目前多采用流式細胞術(shù)檢監測機體的免疫狀態(tài)，其中最重要的指標是檢測T、B和NK淋巴細胞的水平。T細胞主要包括T輔助細胞（Th）和T抑制細胞（Ts）細胞亞群。CD3+細胞代表外周血中總的成熟T細胞，理論上應約等CD4+細胞和CD8+細胞的總和，但往往出現CD4+加CD8+細胞之和大于CD3+，這是因為CD4+細胞包括CD3+/CD4+細胞（真正Th細胞）和CD3-CD4+細胞（非Ts細胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+CD56+細胞（一部分NK細胞）和CD3-CD8+CD16+CD56-(未知細胞)。由此可見(jiàn)，真正的TH細胞是CD3+CD4細胞，真正Ts細胞是CD3+CD8+細胞。尤其當患者NK細胞明顯增加時(shí)，會(huì )使CD4細胞和CD8細胞的總和大于CD3+細胞，因此，用三色熒光標記才能分析真正的輔助性T細胞和抑制性T細胞。
3、免疫熒光染色法：MNC懸液的濃度調整至1×107個(gè)/ml，可用細胞懸液與抗壓群McAb在小試管內是反應，也可將細胞懸液涂片，然后同酶免疫染色操作。根據條件可選擇直接法和間接法。T細胞表面抗原直接或間接與熒光抗體結合，通過(guò)熒光顯微鏡或流式細胞儀（FCM）計數。
4、補體殺傷試驗：將淋巴細胞同其McAb(應是細胞毒抗體)作用，加入兔或豚鼠血清（預先選擇對淋巴細胞無(wú)毒性）提供補體?？乖贵w結合，在補體參與下,T細胞膜受損，通透性增加，然后用活細胞或死細胞染色法染色，光鏡計數死細胞百分比，以確定相應T淋巴細胞亞群比例。
5、花環(huán)形成試驗：常用的有紅細胞花環(huán)和細菌花環(huán)，通過(guò)抗T細胞McAb與T細胞表面抗原結合形成可觀(guān)察的花環(huán)。
(1）直接紅細胞花環(huán)試驗：經(jīng)醛化的紅細胞與T細胞McAb連接成指示劑。當淋巴細胞周?chē)Y合4個(gè)以上紅細胞者為陽(yáng)性細胞。
(2)間接紅細胞花環(huán)試驗：以結合了抗鼠IgG的醛化紅細胞為指示細胞，淋巴細胞借T細胞McAb同指示細胞結合形成花環(huán)，光鏡計數，結合3個(gè)以上紅細胞者為陽(yáng)性細胞。
(3）SPA菌花環(huán)試驗，以葡萄球菌為指示劑。SPA同抗T細胞McAb或抗鼠IgG結合，然后直接或者間接與淋巴細胞形成花環(huán)，染色后油鏡下觀(guān)察。凡周?chē)B接10個(gè)以上葡萄球菌的淋巴細胞為陽(yáng)性細胞。
（二）、組織中T細胞亞群的檢測：
由于淋巴細胞表面抗原比較脆弱，組織切片不宜常規制片，而需采用冰凍切片。常用的方法有酶免疫組織化學(xué)方法和免疫熒光技術(shù)。如需對T細胞進(jìn)行定位，可選擇分離的淋巴細胞進(jìn)行分析。
三、T細胞亞群檢測的臨床意義：
體液中T細胞亞群的分析和組織內的定位檢測作為判斷細胞免疫功能的一項重要指標，對惡性腫瘤，自身免疫性疾病，血液系統疾病，同種組織器官移植，以及各種傳染病的診斷，發(fā)病機理的研究，指導免疫治療和判斷預后等方面平均具有重要意義。外周血T細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+的改變常見(jiàn)的有：
（一）、CD3+細胞數的改變，表示T淋巴細胞總數在外周血MNC中的比例的變化。
1、下降常見(jiàn)于：某些白血病，應用免疫抑制劑，化療或放療過(guò)程中，長(cháng)期接受放射性物質(zhì)，先天性細胞免疫缺陷者，艾滋病，多發(fā)性骨髓瘤，傳染性單核細胞增多癥，某些病毒感染性疾病。
2、增高可見(jiàn)于：重癥肌無(wú)力，某些自身免疫性疾病，慢性活動(dòng)性肝炎、系統性紅斑狼瘡等。
（二）、CD4+/CD8+細胞比值改變：表明機體細胞免疫功能紊亂。不管是CD4+或CD8+細胞數發(fā)生變化均影響該比值。
1、下降是由于CD4+細胞減少或CD8+細胞增多。常見(jiàn)于再生障礙性貧血，某些白血病，骨髓移植后，急性乙型肝炎及無(wú)癥狀攜帶者，傳染性單核細胞增多癥，免疫缺陷綜合癥，艾滋病，某些病毒感染，惡性腫瘤，結核病，同種器官移植排斥階段等。
2、升高常由于CD4+細胞增多或CD8+細胞減少所致?？梢?jiàn)于某些自身免疫性疾病，系統性紅斑狼瘡。
四、評價(jià)及發(fā)展前景：
根據T細胞表面標志，檢測T細胞亞群是目前觀(guān)察機體細胞免疫水平的重要方法之一。但由于T細胞亞群的復雜性，表面標志和功能之間的相對性，以及檢測方法的多樣性等，所以只根據外周血CD3+，CD4+和CD8+細胞亞群的水平判斷機體細胞免疫功能有一定局限性，需要結合具體疾病和病情程度進(jìn)行綜合分析，近年來(lái)新的抗T細胞亞群McAb及新型McAb的問(wèn)世，為T(mén)細胞亞群檢測的進(jìn)一步發(fā)展提供了可能。鑒于目前的研究狀況和存在的問(wèn)題，T細胞亞群的檢測可從以下幾方面改進(jìn)和發(fā)展：1、應用多種McAb做雙標記或多標記檢測，也可用雙特異性McAb染色，對T細胞進(jìn)一步分群。2、改進(jìn)檢測技術(shù)，確定標準的檢查方法，建立一定的質(zhì)量控制措施，提高檢測水平；3、結合細胞因子和組織中T細胞亞群的檢測，綜合判斷機體免疫功能；4、建立檢測特異性T細胞亞群或克隆的方法。
雷德生物免疫細胞
雷德生物主要銷(xiāo)售業(yè)務(wù)以免疫細胞為核心的免疫產(chǎn)品系列，圍繞PBMC,CD4+,CD8+,CD14+,CD19+,Treg等免疫細胞亞群產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)項目進(jìn)行市場(chǎng)推廣和營(yíng)銷(xiāo)網(wǎng)絡(luò )建設，重要的客戶(hù)群體集中在蛋白抗體藥物研發(fā)企業(yè)和細胞免疫治療企業(yè)及醫療機構，提供以免疫細胞功能分析為基礎特色的科研產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)項目，主要包括專(zhuān)用于生物大分子抗體藥物研發(fā)篩選，藥物毒理藥效學(xué)分析，高通量免疫性疾病研究的標準化免疫細胞生物樣本庫，細胞治療領(lǐng)域中的細胞功能分析的產(chǎn)品和服務(wù)，高通量免疫性疾病研究的標準化免疫細胞生物樣本庫，細胞免疫領(lǐng)域中的細胞功能分析的產(chǎn)品和服務(wù)，圍繞世界500強醫藥研發(fā)中心，國內抗體藥物研發(fā)企業(yè)，細胞治療技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗室等機構形成了較強的品牌影響力。
質(zhì)量控制
PBMC取自血液制品，按照標準操作流程分離制備，保證不同批次間細胞質(zhì)量的穩定性。建立了嚴格的細胞鑒定流程，所提供的原代細胞均經(jīng)過(guò)細胞類(lèi)型特異性標記物、細胞形態(tài)學(xué)檢測，保證細胞純度＞95%，細胞活性＞90%；每個(gè)批次的產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)微生物、HIV、HBV、HCV、梅毒等檢測。
